牛α干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性鉴定

作者：王延群; 张璐; 李玉明; 汪志艳; 金家民; 刘永刚; 王刚; 王淑杰; 姜成刚; 涂亚斌; 蔡雪辉

来源：中国预防兽医学报, 2013, (10): 845-848.

• 牛IFN-&alpha
• 毕赤酵母
• 分泌表达 bovine IFN-&alpha
• Pichia pastoris
• secretory expression

为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SDS-PAGE和western blot检测,并优化重组菌的诱导表达条件。结果显示:筛选获得高效分泌表达boIFN-α的重组菌,其最佳诱导条件为:250 r/min,26℃培养,1%甲醇浓度诱导,诱导72 h。上清中目的蛋白表达量最高可达200μg/mL,本研究为boIFN-α在生产中的应用奠定了基础。

• 单位
  东北农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所