柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达

作者：陈佳; 戚南山; 廖申权; 吴彩艳; 吕敏娜; 李娟; 吴玄光; 孙铭飞

来源：动物医学进展, 2013, (07): 35-38.

• 柔嫩艾美耳球虫
• 二氢乳清酸脱氢酶
• 电子克隆
• 原核表达 Eimeria tenella
• dihydroorotate dehydrogenase
• in silico cloning
• expression

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。

• 单位
  华南农业大学; 广东省农业科学院