捻转血矛线虫ZJ株疫苗候选抗原H11亚型基因H11-4的克隆及序列分析

作者：段丽君; 周前进; 张红丽; 杨怡; 闫宝龙; 杜爱芳

来源：中国兽医学报, 2013, (03): 381-385.

• 捻转血矛线虫
• 疫苗候选抗原基因
• H11-4 Haemonchus contortus
• the vaccine candidate antigens
• H11-4

微粒体氨肽酶H11天然提取物是目前捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)防治研究中最好的疫苗候选抗原之一,但其重组形式均不能提供有效的免疫保护效果;同时报道H11蛋白存在多种亚型,推测其某种亚型或亚型组合可能在天然提取物参与免疫保护中起了关键作用。本试验参考NCBI公布的H.contortus H11-4基因序列,设计2对特异性引物,以H.contortus ZJ株总RNA为模板,利用RT-PCR技术分段扩增出该基因的部分片段,并进行T-A克隆。测序正确后,利用含有不同片段的阳性质粒经BamHⅠ/NcoⅠ消化,连接后获得H11-4基因的全长cDNA序列。测序结果显示成功获得H11-4基因,开放阅读框大小为2 916bp,与NCBI中公布的核苷酸序列同源性为97.8%,氨基酸序列同源性为97.6%。生物信息学分析,已获得的H11-4与H11(H11-3)亚型氨基酸序列高度同源,且具有保守糖基化位点、相对保守的跨膜区与微粒体氨肽酶活性中心锌指基序。为进一步分析H11天然提取物各亚型在参与免疫保护的机制和角色分工奠定了基础。

• 单位
  浙江大学