泛素C端水解酶L1的RNA干扰载体的构建及效果评价

作者：赵博; 刘晓华; 段梦; 张志清; 冷雪; 王立群; 武磊; 段瑞峰; 王广增; 张艳淑

来源：生物技术通讯, 2013, (02): 188-192.

• 泛素C端水解酶L1
• RNA干扰
• HEK293细胞
• 血管平滑肌细胞 ubiquitin C terminal hydrolase L1
• RNA interference
• HEK293 cell
• vascular smooth muscle cells

目的:获得抑制效果好的泛素C端水解酶L1(UCH-L1)基因小干扰RNA(siRNA)干扰载体。方法:根据Gen Bank中大鼠UCH-L1基因序列设计并合成4对siRNA寡核苷酸序列,将4对寡核苷酸序列退火成双链后分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR中构建4个siRNA表达质粒,测序鉴定后将4个siRNA表达质粒分别转染HEK293细胞,利用Western印迹和qPCR方法检测干扰效果;将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒,感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),并采用TNFα干预诱导UCH-L1表达升高,Western印迹验证干扰效果。结果:测序分析证实4对siRNA寡核苷酸序列分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR;qPCR检测与Western印迹均表明第3号siRNA表达载体对UCH-L1表达的抑制程度最高,将其包装成腺病毒并转染VSMC能显著抑制TNFα诱导的UCH-L1表达升高。结论:构建并筛选出干扰效果好的UCH-L1 siRNA干扰载体。

• 单位
  河北联合大学; 中国人民解放军军事医学科学院