构建β-甘露聚糖酶的黑曲霉工程菌

作者：张莹莹; 张会; 李杰

来源：生物技术, 2013, (03): 31-36.

• &beta
• -甘露聚糖酶
• 黑曲霉
• 基因置换
• 农杆菌
• 同源重组 &beta
• -mannanase
• Aspergillus niger
• Gene replacement
• Agrobacterium tumefacien
• Homologous recombination

目的:在黑曲霉CICC2462中表达经过改造的β-甘露聚糖酶基因(MAN)。方法:从黑曲霉CICC2462中扩增得到MAN(1 275bp),并针对黑曲霉CICC2462中高表达的糖化酶基因(glaA)位点,通过重叠延伸PCR将MAN基因片段与glaA的5’、3’同源臂进行拼接得到同源重组表达框GMG,将其定向插入表达载体pSZH-CYM中,构建黑曲霉表达载体pSZH-MAN,进而通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。结果:经筛选获得4株重组菌株,并从中筛选出在glaA位点发生基因置换的同源重组菌株1株。对4株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明MAN基因在黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养8d后其分泌表达的β-甘露聚糖酶酶活最高可达12 467.2U/mL,而在出发菌株最高仅可达171.4U/mL,重组菌株是出发菌株的72倍。结论:此研究为简化β-甘露聚糖酶发酵生产工艺、提高产量提供了新的途径。

• 单位
  东北农业大学; 生命科学学院