鸡TLR3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备

作者：王杲强; 葛铭; 于群; 李广兴; 张瑞莉

来源：黑龙江畜牧兽医, 2013, (03): 114-117.

• 鸡Toll样受体3(chTLR3)
• 基因表达
• 多克隆抗体 chicken toll-like receptor 3(chTLR3)
• gene expression
• polyclonal antibody

为了研究Toll样受体3(chTLR3)在病毒感染过程中的作用,试验采用RT-PCR技术从雏鸡法氏囊组织中扩增chTLR3胞外区部分基因片段(大小为1 317 bp),将其克隆于表达载体pET30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,然后进行IPTG诱导表达;用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹(Western-blot)及体外瞬时转染方法进行检测。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为55.8 ku,主要以包涵体形式存在,试验制备的兔抗chTLR3抗血清效价在1∶32 768以上,具有良好的免疫反应特性。

• 单位
  东北农业大学