小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析

作者：俞昭旸; 李巍; 唐颖; 李兴超; 刘畅; 禹洋; 徐佳; 宋铭忻

来源：中国兽医科学, 2013, (03): 315-319.

• Toll样受体2
• 真核表达
• 双荧光素酶
• 核转录因子-&kappa
• B Toll-like receptor 2
• eukaryotic expression
• dual luciferase
• NF-&kappa
• B

采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2。重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧光检测其表达及细胞定位。利用TLR2激活物pam3csk4刺激转染重组质粒的HEK293T细胞后,用双荧光素酶报告基因系统分析其下游转录因子NF-κB的转录活性。结果显示,mTLR2转染后成功表达并定位于细胞膜,pam3csk4刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组,说明表达的mTLR2具有野生型分子的功能。本研究成功克隆与表达了mTLR2基因且表达产物具有生物学活性,为研究TLR2信号通路及其在抗寄生虫感染中的作用奠定了基础。

• 单位
  东北农业大学; 哈尔滨医科大学