细胞人基因组DNA对荧光实时定量PCR检测细胞培养液中HBV DNA的影响

作者：潘孝本; 韩进超; 朱凌; 高燕; 魏来

来源：中国医药生物技术, 2007, (05): 341-345.

• 基因组
• 人
• DNA
• 肝炎病毒
• 乙型
• 聚合酶链反应

目的研究细胞人基因组DNA对荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测细胞培养上清液中HBV DNA含量的可能干扰影响,提高细胞培养上清液中HBV DNA定量检测的准确性。方法取HBV DNA阳性血清,以DMEM培养基分别配制出HBV DNA拷贝数为5×107/ml(高拷贝组)、5×105/ml(中拷贝组)、5×103/ml(低拷贝组)的不同样本组;各组内再分5个亚组,分别加入终浓度为0(对照组)、12.5、25、50、100μg/ml的细胞人基因组DNA(提取自人肝癌细胞系HepG2)。以不含HBV DNA阳性血清的DMEM培养基加入上述浓度细胞人基因组DNA为空白组。采用基于TaqMan技术的FQ-PCR检测各组样本的HBV DNA拷贝数并绘制HBV DNA定量曲线。每组均重复检测10次。根据HBV DNA定量检测结果确定受干扰样本和未受干扰样本,分别计算其定量曲线线性期斜率和平均扩增效率。结果高拷贝组中加入不同浓度细胞人基因组DNA的各个亚组与相应对照组比较,HBV DNA拷贝数差异均无统计学意义。中拷贝组中加入细胞人基因组DNA浓度为50和100μg/ml的2个亚组,其HBV DNA拷贝数结果明显高于相应...

• 单位
  北京大学