人端粒酶逆转录酶慢病毒载体的构建及人肝细胞的初步筛选

作者：梁旭竞; 陈小佳; 金玲; 李丽玲; 汤绍辉; 陈友鹏; 杨冬华

来源：中国病理生理杂志, 2009, (04): 826-829.

• 端粒酶逆转录酶
• 慢病毒载体
• 肝细胞 Telom erase reverse transcriptase
• Lentiviral vector
• Hepatocytes

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞。方法:以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1-hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-hTERT和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT。将重组载体pLenti6/V5-DEST-hTERT与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞,获得重组慢病毒颗粒。将其感染人肝细胞L02,通过杀稻瘟筛选获得阳性克隆。结果:测序发现入门载体pDONR...

• 单位
  暨南大学生物工程研究所