柱花草炭疽菌致病力丧失突变菌株1869的T-DNA插入位点侧翼序列的克隆

Authors：许沛冬; 郑肖兰; 赵艳; 李秋洁; 吴伟怀; 贺春萍; 习金根; 梁艳琼; 郑金龙; 戚山江; 张晓波; 易克贤

Source：草业学报, 2015, (08): 142-149.

• 柱花草
• 炭疽菌
• T-DNA
• 致病力
• 基因克隆

通过对实验室已构建的柱花草炭疽菌T-DNA突变体库中各转化子致病力的测定,获得致病力丧失突变菌株1869。对其进行PCR检测以验证T-DNA在1869基因组中插入情况,并测定观察其菌落直径、菌落形态及产孢量等生物学特性,利用TAIL-PCR克隆标记基因侧翼序列,采用生物信息学方法比对基因信息。结果表明,与柱花草炭疽菌野生型菌株CH008相比,突变菌株1869表现致病力丧失,菌落生长速率也显著低于野生型;然而,在分生孢子形态、产孢能力、孢子萌发率等方面与野生型并无明显差异。TAIL-PCR扩增得到T-DNA插入位点RB端序列467bp,LB端侧翼序列388bp,经两侧序列拼接比对,所得序列与Pac1同源性达到92%~96%,推测可能由于基因表达产物调节菌株对pH值的敏感性,从而影响了其致病过程。

• Institution
  海南大学; 中国热带农业科学院; 中国热带农业科学院椰子研究所; 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所; 中国热带农业科学院/环境与植物保护研究所